Ergens in een buitenwijk in London, wordt in zijn laboratorium Bartholomew Sholto op zeer geheimzinnige wijze vermoord. Tegelijkertijd zoekt de mooie Mary Morstan hulp bij Sherlock Holmes en Dr. Watson. Haar vader is op mysterieuze wijze verdwenen. Mary overhandigt Holmes enkele aanwijzingen waarna hij op onderzoek uitgaat. Het spoor leidt naar het laboratorium van Bartholomew Sholto, maar wanneer ze daar aankomen is hij al overleden, ze vinden echter wel een briefje in het laboratorium waarop “Het Teken van de Vier” staat.